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喹乙醇检测

来源:发布时间:2017-03-06

 

  喹乙醇(Oiaqiiindox),又称喹酰胺醇,属于喹噁啉类,冷水中微溶,甲醇、乙醇和氣仿中几乎不溶。是一种化学合成抗菌促生长剂。因其具有广谱抗菌效果 和促生长作用,作为饲料添加剂被广泛用于畜禽及水 产品的养殖。大疳生物毒性试验研究表明,喹乙醇可 在动物体内形成残留,具有明显的蓄积毒性和DNA 显性损伤等毒副作用。基于可能对人体健康造成危害,欧盟委员会2788/98决议规定禁止喹乙醇的使 用。国内也对喹乙醇的使用童做了限制,并且为了 加强对喹乙醇的监控,制定了水产品、肉与肉制品、动物饲料中喹乙醇的检测方法。近来与猪肉有关的食品安全问题频发,为了能保证食品的安全,建立肉中 喹乙醇的测量方法是十分必要的。
  目前,对于饲料、肉类以及水产品等食品中喹乙 醇的检测方法主要有金标快速检测、液相色谱法、超高效液相色谱、液相-质谱联用技术。虽然液 相-质谱联用技术被越来越多地应用于动物源性食品中禁用药物的检测,但其价格昂贵,检测成本高,对 其普及发展有一定的限制;液相色谱仪则越来越多的 应用到基层的检验工作。本文针对猪肉的喹乙醇残 留,建立了高效液相色谱检测方法,并通过对样品前处理等方面进行探讨,希望能对相关的工作有一定的 帮助。
  1材料与方法
  1.1仪器与试剂
  AgilentllOOHPLC仪:四元泵,柱温箱,DAD检测器(二极管阵列检测 器)。双列四孔水浴锅、祸旋混合器(GENIUS3)、旋转蒸发器(HE-52)、台式离心机、真空离心浓缩仪(ZLS -1)。乙腈(色谱纯)、甲醉(色谱纯)、正已烷(色谱 纯)、实验用水(符合GB/T 6682三级水和二级水的要 求)、喹乙醇(Fluka,纯度96.1%,批号:33987)。
  1.2方法
  1.2.1标准溶液的配制标准储备液:准确称取 0.0010 g喹乙醇于10 ml容最瓶中,用甲醇定容至刻度,此标准溶液浓度100μg/ml。标准溶液使用液:分 别吸取标准溶液,用乙腈+水(10 +90)配制成浓度为
  2.0 μg/ml、4.0μg/ml、8.0 μg/ml、10 μg/ml
  的标准溶液使用液。
  1.2.2 色谱条件
  色谱柱:ODS柱(200 mm x 4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈+水(10 +90);流速: 0.80ml/min;柱温:35 ℃进样量:20 μl;检测波长:
  380 nm;保留时间:5.53 min。
  1.2.3 样品前处理
  称取样品4.0 g于50 ml具塞离心管中,加20 ml甲醉+水(1 +1),混匀于60℃水浴10 min,5 000 r/min 离心10 min,取上清液到 100 ml分液漏斗中,再用甲醇10 ml提取一次,合并上 清液,用20 ml正已烷净化,静置10 min后,将下层液 体收集到旋转蒸发瓶中。用10 ml甲醇洗正已烷层, 合并提取液,60℃旋转至近1 ml,转移到1.5 ml血清管中,用真空离心浓缩仪浓缩至1 ml以下,用甲醇定容到1 ml。涡旋,高速离心,取20 μl上清液上机分析。
  2.结果与讨论
  2.1样品前处理
  样品的前处理方法对喹乙醇的分析至关重要。喹乙醇在热水中溶解度很大,而在有机溶剂中溶解度较低,所以本文采用60℃水浴加热的 方法进行提取。经与乙腈+水(80+20)作为提取液进行比较,结果显示采用热水作为提取液的回收率 明显较高。其中乙腈+水作为提取液的回收率在 60%左右,而热水作为提取液的回收率在85%以上。因为水溶液不易浓缩处理,故采用有机溶液和水进行 混合进行提取回收率在85%左右。通常用甲醇和乙膪做为提取液的有机部分,实验表明:在相同分数的 水溶液其提取效果基本一致,由于乙腈毒性远远大于 甲醇,本文采用甲醉和水组成提取液。在甲醉和水的 体积比方面,分别进行了 20 +80、30 +70、40 +60、50 + 50、60+40、70 + 30、80 +20 实验。在50 +50 以后 提取的效果一致,但随着水体积的增加,旋转浓缩的 时间加长,因此选用了甲醇+水(50 +50)的提取条 件。对于动物源性样品,脂肪等杂质是主要的干扰物质。加人正己烷进行净化,不仅能有效地去除提取液中的水溶性杂质和脂肪,并且具有较强的脱色作用。 用甲醇净化正已烷,可以提高回收率,从65%左右提高到85%左右。
  2.2方法的线性
  方法测定用的标准曲线为 2.0 μg/mlN4.0μg/mlN6.0 μg/mlN8.0 μg/ml 10 μg/ml其测定的峰面积分别为99.3 mAU • s、199mAU·s、 299 mAU • s、391 mAU • s、486 mAU • s;
  则喹乙醇的线性回归方程:y =48.67x +2.50,相关系数r:0.9998。
  喹乙醇标准溶液的色谱图见图1。
  2.3方法精密度和回收率
  准确称取4.0 g样品作为 本底,添加2.0网、5.0网、9.0叫喹乙醇做加标回收实验,同时做6个平行样,按分析步骤进样样品前处理后,上机测定。
结果见表1,样品加标谱图见图2。
  本方法回收率在83.2% ~ 84.6%之间。用6个 加标后样品测定值计算精密度值为1.2% ~ 2.2%.
  2.4方法检出限
  基线点对点噪音为0.04 mAU,3 倍噪音时,对应浓度为0.01 μg/ml,当取4.0 g样品时,检出限为40 μg/kg。
  本方法检出限低,回收率高,定性可靠,定景准确,适合于猪肉中喳乙醉残留的检测。本实验室用该方法对本地区市场流通的25份猪肉进行了检测,均未检测出喹乙醇残留。